盡管擴增序列的(de)(de)殘留污(wu)(wu)染大部分是假陽性反應的(de)(de)原(yuan)因,樣品間的(de)(de)交叉污(wu)(wu)染也(ye)是原(yuan)因之一。因此(ci),不僅要在(zai)進行擴增反應是謹(jin)慎(shen)認真(zhen),在(zai)樣品的(de)(de)收集、抽(chou)提(ti)和擴增的(de)(de)所有(you)環節都(dou)應該注(zhu)意:
1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立(li)即更換(huan)手套;
2.使用(yong)一次性吸(xi)頭(tou),嚴禁與PCR產物(wu)分析室的吸(xi)頭(tou)混用(yong),吸(xi)頭(tou)不要長時間暴(bao)露于(yu)空氣(qi)中(zhong),避免(mian)氣(qi)溶膠的污染;
3.避免反應(ying)液(ye)(ye)飛濺(jian),打開反應(ying)管時(shi)為避免此種情況,開蓋前稍離心(xin)(xin)收集液(ye)(ye)體于(yu)管底。若不小心(xin)(xin)濺(jian)到手(shou)(shou)套或(huo)桌面上(shang),應(ying)立刻更換手(shou)(shou)套并用稀酸擦拭桌面;
4.操(cao)作(zuo)多份樣品時,制備(bei)反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好(hao),然后分裝,這樣即可(ke)以(yi)減(jian)少(shao)操(cao)作(zuo),避(bi)免污(wu)染,又(you)可(ke)以(yi)增加(jia)反應的精確(que)度;
5.最(zui)后加入反應模板,加入后蓋(gai)緊反應管(guan);
6.操(cao)作時設立陰陽性對(dui)(dui)照和空白(bai)對(dui)(dui)照,即可(ke)(ke)驗(yan)證(zheng)PCR反應的可(ke)(ke)靠(kao)性,又可(ke)(ke)以協助判斷(duan)擴增(zeng)系統(tong)的可(ke)(ke)信性;
7.盡可(ke)能用(yong)(yong)可(ke)替(ti)換(huan)或(huo)可(ke)高(gao)壓(ya)(ya)處(chu)理(li)的加(jia)(jia)樣器(qi),由于加(jia)(jia)樣器(qi)最容(rong)易(yi)受產物氣溶膠或(huo)標本DNA的污(wu)染,最好使用(yong)(yong)可(ke)替(ti)換(huan)或(huo)高(gao)壓(ya)(ya)處(chu)理(li)的加(jia)(jia)樣器(qi)。
如(ru)沒(mei)有這種特(te)殊的加樣(yang)器,至少PCR操作過(guo)程中加樣(yang)器應(ying)該專用,不能交(jiao)叉使用,尤(you)其是PCR產物(wu)分析所(suo)用加樣(yang)器不能拿到其它(ta)兩個(ge)區(qu);
8.重復實驗,驗證(zheng)結果(guo),慎下結論。